ELISA试剂盒为捕获抗体具有高亲和力、高特异性、低内毒素的单抗,研究者以刺激剂激活细胞时,不会影响活化细胞分泌细胞因子。ELISA试剂盒的原理是什么?
到目前为止,ELISA法仍在研究当中占有着主流地位,普遍应用使得实验更加方便、经济和准确, ELISPOT技术的优点也决定了它的发展潜力。LISPOT法来源于ELISA,相比较传统的ELISA法有所突破,是定量ELISA技术的延伸和发展。由于游离的循环抗体或CK的半哀期不同,使之在体液中不断的被代谢或与靶器官结合,传统的酶联吸附法(ELISA法)不能确切的反映体内的抗体及CK的水平。
ELISA试剂盒的原理包括了可以提了两款改良型siRNA用于活体转染。可以增加siRNA-转运试剂复合体的稳定性。而SIRNAPLUS则不需要转运试剂,其转运载体就整合在siRNA分子上。为了解决这一问题,公司开发了一个试剂盒,可以将shRNA插入到基因组的特定位置。这一靶向整合试剂盒采用锌指核酸酶技术,将 shRNAELISA试剂盒插入到人类基因组的AAVS1位点。这一技术将shRNA定位在一个地方,使影响shRNA表达水平的一个重要变量固定下来。
ELISA试剂盒普遍用作非放射性同位素的成键化验。在这种方法中,通常标准配体是固定的,通过加入溶液相受体或蛋白质来使之成键。通过加入与受体特异性反应的抗体来定量成键的受体,而且一开始抗体的量以加入第二种能显色的抗体测量。第二种抗体能识别抗体的末端,在其末端的碱性磷酸酯或过氧化物酶等与酶发生反应,从而使溶液显色。
影响ELISA试剂盒实验的因素
一、试剂盒
1、抗原、抗体活性对效价的影响:主要是试剂中抗体(或抗原)的效价降低或失活,结果不易判断。再有ELISA法灵敏度高,对杂质的反应灵敏度也高,实验中空白对照OD值偏高或假阳性;
2、酶结合物浓度过高,也会导致OD值假性增高。
二、试验仪器
1、ELISA试剂盒加样器是否经过校正,酶免测定血清用血量很少,如手工加样器的性能不好,吸取样品不,会使结果忽高忽低;
2、每次洗板前,应检查洗板机针孔有无堵塞。
三、操作
1、检测前先将试剂盒从冰箱取出置室温平衡20min后使用,试剂用完及时放回冰箱冷藏,以免造成试验结果假性降低;
2、加样时注意勿触及包被板底部,以免擦伤包被物使抗体(抗原)脱落而影响实验结果的准确性;
3、洗涤不充分,会使结果假性增高,过分洗涤呈假阴性;
4、比色时应保持包被孔底部无异物、无水汽,特别是冬季板从37℃水浴箱取出时,底部留有水汽,应将板底擦干后进行比色,水汽或孔内气泡也会使OD值升高;
5、抗原与抗体反应达到完全平衡,依赖于温度与时间。温度45℃易引起失活及标记物脱落,温度低于4℃,影响反应速度。
elisa试剂盒价格具有以下优点:
1)快速: 仅需传统夹心法ELISA 1/3的操作时间,1小时即可完成整个试验流程;
2)简单: 只需1个洗涤步骤;
3)灵活: 可单或同时检测总蛋白及磷酸化蛋白,可在同一板上检测不同的靶蛋白;
4)灵敏: 达到甚至超过行业标准,且结果一致性良好;
5)兼容: 常规比色法检测,实验室常规酶标仪读数;
elisa试剂盒是一种敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊断方法,由于其试剂稳定、易保存、操作简便、结果判断较客观等因素,以及既适宜于大规模筛查试验又可以用于少量标本的检测,既可以做定性试验也可以做定量分析等优点,已广泛应用于微生物学、寄生虫学、肿瘤学和细胞因子等领域。
检测种属:人、大小鼠、豚鼠、兔子、猪、犬、牛羊、鸡鸭、猴ELISA试剂盒等种属。
检测范围:
20μg/L -400μg/L
保存条件及有效期:
1、试剂盒保存:2-8℃。
2、有效期:6个月
ELISA试剂盒:准备与贮存
ELISA试剂盒收到后立即贮存于2-8℃下,效期见试剂盒标签;所有成分在2-8℃下可保存至有效期。使用前,所有试剂平衡至室温,不同批次的试剂不能交换使用。
1. 包被板,96孔,包被了抗人胎球蛋白A抗体;微孔板固定于板架上,密封于含有干燥剂的铝箔密封袋内;贮存于2-8℃至有效期。
2. 胎球蛋白A示踪抗体,1瓶,0.6 ml,浓缩,HRP标记的抗人胎球蛋白A示踪抗体溶于稳定的蛋白基质中;此试剂使用前需用示踪剂抗体稀释液进行稀释;贮存于2-8℃至有效期。
3. 示踪抗体稀释液,1瓶,11ml,即用,Trizma盐酸溶于缓冲液;根据实验步骤用于示踪抗体稀释;贮存于2-8℃至有效期。
4. 试验缓冲液,浓缩,1瓶,11ml,含牛血清白蛋白的磷酸缓冲盐;建议使用前以1:10比例用双蒸水稀释(如11 ml浓缩+99 ml的双蒸水);贮存于2-8℃至有效期。
5. 洗涤液,浓缩,1瓶,20ml,30倍浓缩;试验前需用580ml的双蒸水稀释,混匀;一旦稀释,不含叠氮化物防腐剂的磷酸缓冲盐洗涤液会含表面活性剂;稀释的洗涤液在室温下可保存至效期。
6. HRP底物液;1瓶,12ml,含过氧化氢的TMB底物液;贮存于2-8℃至有效期。
7. 终止液,1瓶,12ml,0.5M硫酸,贮存于2-8℃至有效期。
8. 胎球蛋白A标准品,5瓶,含胎球蛋白A,不含叠氮化物防腐剂的液态牛血清基质;各标准品浓度见瓶子标签;3次冻存周期使用后,所有标准品保存至-20℃或更低。
9. 胎球蛋白A质控,2瓶,含人胎球蛋白A,不含叠氮化物防腐剂的液态牛血清基质,各质控的浓度范围见瓶子标签,3次冻存周期使用后质控保存至-20℃或更低。
ELISA检测方法的三大特点表现:
1. 稳定性好:包被的抗原的稳定性可使试剂盒的效期得到,早期以合成肽为包被抗原的试剂盒效期只有3-4个月,采用基因工程抗原后效期大大延长了。
2. 基因工程抗原将特异性抗原决定簇基因融合表达,表达产物包含更多的抗原决定簇,可提高试剂盒的灵敏度,提高检出率。
3. 分子量大:合成肽采用化学方法制备,由于工艺的局限,合成数量有限,只能达到数百个氨基酸。而利用基因工程制备的抗原,分子量更大。
ELISA标本之脑血浆的稀释:
1. 用EDTA2K离心收集在真空血液收集管中的血液,5,000×g,15分钟,4℃,分离血浆样品,然后储存在零下80℃直到使用。
2. 用试剂盒中的标准稀释液5倍稀释血浆以避免血浆中的干扰物质影响检测,按照说明书方法检测。