人高迁移率族蛋白1(HMG-1)ELISA试剂盒实验使用说明书主要包括以下内容:
一、实验原理
试剂盒采用双抗体夹心法酶联吸附试验(ELISA)原理。预先包被高迁移率族蛋白1(HMG-1)抗体的微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤后,用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅与样品中的HMG-1浓度呈正相关。通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),可以计算样品浓度。
二、试剂盒组成
试剂盒通常包括酶标板、酶标抗体工作液、标本稀释液、浓缩洗涤液、标准品、底物工作液等组件,具体组成可能因不同品牌而有所差异。这些组件需在2-8℃条件下保存。
三、样品收集、处理及保存
血清:使用不含热原和内毒素的试管收集血液,离心分离血清和红细胞,取上清检测或冻存于-20℃/-80℃。
血浆:使用EDTA、柠檬酸盐或肝素作为抗凝剂,离心取上清检测或冻存23。
其他样本如细胞上清液、组织匀浆等也需经过适当处理后方可检测25。
四、实验步骤
提前从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温。
配制洗涤液,将浓缩洗涤液按一定比例稀释。
按照说明书操作,依次加入标本、标准品、检测抗体等,进行温育和洗涤。
加入底物TMB显色,并在规定时间内加入终止液。
使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),并根据标准曲线计算样品浓度。
五、注意事项
试剂盒需保存在2-8℃,使用前需室温平衡。
实验中不用的板条应立即放回自封袋中密封保存。
严格按照说明书中的时间、加液量及顺序进行操作。
所有液体组分使用前需充分摇匀。
六、自备物品
进行ELISA实验还需自备一些实验器材,如酶标仪(450nm)、加样器及枪头、37℃恒温箱等。
请严格按照本说明书进行操作,以确保实验结果的准确性。如有任何疑问或问题,请及时联系供应商或技术人员进行咨询。